Skip to content

Wykrywanie Monkeypox u ludzi na półkuli zachodniej ad 6

3 miesiące ago

542 words

Barwniki immunohistochemiczne dla wirusów opryszczki pospolitej i 2 oraz wirusa cytomegalii były ujemne. Próbki tkanek od siedmiu pacjentów i submaribularny węzeł chłonny od Prairie Dog zaszczepiono na pierwotnych i ciągłych liniach komórkowych, w tym nerce rezus-małpa, nerce królika, MRC-5, RD, HEp-2, B-SC-40 i VERO. komórki. Z wyjątkiem komórek HEp-2, zmiany cytopatyczne zachodziły we wszystkich liniach komórkowych w ciągu jednego do czterech dni i charakteryzowały się płytkami wydłużonych i zaokrąglonych komórek z wyraźnym mostkiem cytoplazmatycznym i tworzeniem syncytium.
Transmisyjną mikroskopię elektronową wykonano na próbkach biopsji skórki aldehydu glutarowego u dwóch pacjentów.11,12 W obrębie cytoplazmy keratynocytów obserwowano wiriony w różnych etapach składania (Figura 3D). Przekroje dojrzałych wirionów zawierały żyły o kształcie hantli, charakterystyczne dla pokswirusów (ryc. 3E). Badanie pod mikroskopem ujemnym z kwasem fosforowolframowym13 wykonano na hodowlach z Pacjenta 2 i Prairie Dog i ujawniono liczne wiriony w kształcie cegieł z regularnie rozmieszczonymi, nitkowatymi grzbietami na odsłoniętych powierzchniach (Figura 3F). Podsumowując, cechy kultury komórkowej i ultrastruktury sugerowały, że wirus był członkiem rodzaju orthopoxvirus.
Figura 4. Figura 4. Reakcja z łańcuchem polimerazy Amplifikacja ortokoksywirusowego genu hemaglutyniny, po którym następuje analiza polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnie próbek od pacjenta 4, psa Prairie i izolowanych izolatów innych ortopoksywirusów (panel A) i drzewa filogenetycznego z Izoluje ortokoks (panel B). TaqI zastosowano do analizy polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych. Panel B pokazuje, że sekwencje genów próbek od Pacjenta 4 i psa Prairie Dog pokazane w Tablicy A są ściśle powiązane zgodnie z metodami łączenia sąsiadów. Pokazano również znaczące wartości początkowe dla głównych węzłów powstałego dendrogramu genu hemaglutyniny. MPV oznacza wirusa małpy makr, wirusa ospy krowiej CPV, wirusa ospy królików RPV i wirusa krowianki VAC. Odnośne szczepy monkeypox w górnym węźle (np. MPV-UTC) pochodziły głównie z Afryki Zachodniej, podczas gdy szczepy w środkowym węźle (np. MPV-CONGO8) są zazwyczaj pochodzenia kongijskiego (środkowoafrykańskiego). Procenty w panelu B wskazują względne podobieństwo szczepów.
W celu diagnostyki molekularnej DNA ekstrahowano z tkanek, próbek pobranych z wymazów, preparatów dotyku (uzyskanych przez dotknięcie skóry pacjentów) i supernatantów z hodowli komórkowej.14 Próbki kliniczne były pozytywne dla ortopoksywirusa w teście PCR, który wzmacnia konserwatywny odcinek genu polimerazy DNA (E9L) obecny we wszystkich ortopoksywirusach Starego Świata, z wyjątkiem variola. Aby dalej scharakteryzować wirusa, przeprowadzono PCR genów włączających hemaglutyninę i gen ortopoksywirusa, a następnie przeprowadzono analizę polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych.15-18 Profile restrykcyjne uzyskane z próbek od pacjentów i psa Prairie Dog były identyczne jak szczepy referencyjne wirusa monkeypox i różniły się od innych znanych orthopoxvirusów (Figura 4A). Ponadto, test PCR dla genu białka zewnątrzkomórkowej otoczki monkeypox był dodatni. W przeciwieństwie do tego, test PCR w czasie rzeczywistym zaprojektowany specjalnie do identyfikacji sekwencji genów B modyfikującej odpowiedź na cytokiny wirusa krowianki był negatywny.
Połączone wyniki testu PCR z niezależnymi sekwencjami genowymi dostarczyły mocnych dowodów na to, że sygnatury DNA w próbkach klinicznych zostały spowodowane przez ortopoksywirus starego typu
[przypisy: teosyal, bikalutamid, Corsodyl ]
[więcej w: nasiadówka z rumianku, limitki aflofarm, climagyn ]

0 thoughts on “Wykrywanie Monkeypox u ludzi na półkuli zachodniej ad 6”